Etudiant : OUMANSOUR ZIYAD

Filière : Master Biotechnologie, Ecologie et Valorisation des Phytoressources (BEVP)

Encadrant : Pr. BAHHOU JAMILA

Annèe : 2026

Résumé : La contamination microbienne constitue une contrainte majeure et récurrente de la culture des tissus végétaux in vitro, justifiant une attention constante portée aux méthodes de prévention et de contrôle de la pollution indésirable. Sideroxylon spinosum, espèce endémique et menacée du sud-ouest marocain, illustre bien cette problématique : sa culture in vitro est rapportée dans la littérature comme génératrice de pertes considérables liées à la contamination, dont la nature microbienne et les moyens de remédiation demeuraient toutefois mal caractérisés. La présente étude vise à optimiser un protocole de désinfection combinant traitement chimique conventionnel et huile essentielle de romarin (HER) couplée à l’isolement et l’identification des contaminants microbiens associés à la culture in vitro de l'arganier. Neuf protocoles de désinfection ont été évalués, combinant trois durées d'exposition au NaOCl (10, 20 et 30 min) et trois concentrations d'HER incorporée au milieu de culture (0 %, 0,075 % et 0,15%), appliqués à des microboutures et à des graines d'arganier. Les champignons et bactéries contaminants issus des explants ont fait l'objet d'un isolement, d'une purification et d'une identification. Les résultats obtenus montrent que la concentration de 0,075% d'HER a montré un effet stimulant sur le développement des explants. Pour le microbouturage, le protocole 6 (30 min d'exposition au NaOCl à 2,5 % + 0,075 % d'HER) s'est révélé le plus performant, avec un taux de contamination limité à 58,34 %, un taux de débourrement de 4,17 % et l'absence de tout signe de vitrification. Pour la germination in vitro des graines, le protocole 5 (20 min de désinfection + 0,075 % d'HER) a donné les meilleurs résultats : taux de contamination le plus faible (13,34 %), racines plus longues (10,02 cm) et taux de germination élevé (83,34 %). L'identification des champignons issus des microboutures a révélé la présence de neuf genres : Penicillium, Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Botrytis, Rhizoctonia, Stemphylium, Pithomyces et Fusarium. Des isolats fongiques issus des graines ont également été isolés et purifiés en vue de leur identification ultérieure, de même que les contaminants bactériens, dont l'isolement et la purification ont été réalisés. Ainsi, cette étude a permis d’établir un protocole de désinfection optimisé, applicable au processus de micropropagation in vitro de l'arganier pour la production de vitroplants exempts de contamination.